Raw264.7細(xì)胞是一種常用的小鼠單核巨噬細(xì)胞系，廣泛應(yīng)用于炎癥、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和藥物篩選等領(lǐng)域的研究。

1. 細(xì)胞特性

Raw264.7細(xì)胞是一種來(lái)源于小鼠腹腔巨噬細(xì)胞系，具有吞噬能力和分泌炎癥因子的特性。這些細(xì)胞可在體外形成單層培養(yǎng)，是研究炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答的理想模型。

2. 細(xì)胞培養(yǎng)基本條件

培養(yǎng)基：通常使用含有高濃度的L-谷氨酰胺和含有10%胎牛血清（FBS）的培養(yǎng)基，如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）。

培養(yǎng)溫度：在37攝氏度、5% CO2和濕度飽和的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

培養(yǎng)皿：使用無(wú)菌的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶，可選用培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶或多孔板，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇合適的規(guī)格。

3. 細(xì)胞傳代和維持

細(xì)胞傳代：通常將細(xì)胞培養(yǎng)至80-90%的密度時(shí)進(jìn)行傳代，采用0.25%的胰酶-EDTA溶液消化細(xì)胞，然后進(jìn)行分裝。

細(xì)胞培養(yǎng)密度：細(xì)胞培養(yǎng)密度的控制對(duì)于維持細(xì)胞生長(zhǎng)和功能非常重要，一般情況下每平方厘米培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量為1-2×10^5個(gè)。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程

細(xì)胞傳代：定期進(jìn)行細(xì)胞傳代以保持細(xì)胞的健康和增殖能力，通常每2-3天進(jìn)行一次傳代。

細(xì)胞觀察：每天觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況、形態(tài)和污染情況，確保細(xì)胞處于健康狀態(tài)。

培養(yǎng)液更換：每2-3天更換一次培養(yǎng)液，保持培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)因子的充足。

污染檢測(cè)：定期對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行細(xì)菌、真菌和支原體的污染檢測(cè)，確保細(xì)胞培養(yǎng)的純度。

5. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)應(yīng)用

Raw264.7細(xì)胞在炎癥、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和藥物篩選等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用，例如炎癥反應(yīng)模型、免疫應(yīng)答研究、巨噬細(xì)胞功能分析等。

6. 操作技巧

培養(yǎng)操作要嚴(yán)格無(wú)菌，避免細(xì)胞污染。

細(xì)胞傳代時(shí)胰酶的作用時(shí)間要控制好，以避免對(duì)細(xì)胞的傷害。

培養(yǎng)過(guò)程中避免細(xì)胞過(guò)度密集，保證細(xì)胞獲得足夠的營(yíng)養(yǎng)和氧氣。

7. 細(xì)胞凍存和解凍

細(xì)胞凍存：細(xì)胞生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)期后，采用合適的凍存液進(jìn)行細(xì)胞凍存，保存于液氮罐中。

細(xì)胞解凍：使用預(yù)先配制好的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞解凍，快速將凍存管放入37攝氏度水浴中解凍，然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到預(yù)熱的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

總結(jié)

Raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)常規(guī)但關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，需要嚴(yán)格的無(wú)菌操作和培養(yǎng)條件控制。合理的培養(yǎng)條件和操作技巧可以保證細(xì)胞的健康和生長(zhǎng)狀態(tài)，為相關(guān)研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。