293T細胞是一種常用的哺乳動物細胞系,廣泛應用于生物醫(yī)學研究、分子生物學和生物工程等領(lǐng)域。它是由人類胚胎腎細胞(HEK293)經(jīng)過轉(zhuǎn)染SV40大T抗原而來,具有高度的轉(zhuǎn)染效率和良好的細胞生長特性。
1. 細胞培養(yǎng)基選擇
293T細胞通常在高營養(yǎng)的培養(yǎng)基中培養(yǎng),常用的培養(yǎng)基包括DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)或者高糖DMEM,通常添加10%的胎牛血清(FBS)或者去脂血清(FCS)。
2. 細胞培養(yǎng)溫度和CO2濃度
293T細胞通常在37°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細胞培養(yǎng)箱的CO2濃度一般設(shè)置為5%以維持細胞內(nèi)外的pH穩(wěn)定性。
3. 細胞培養(yǎng)器皿選擇
293T細胞可以在培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶或者多孔板中培養(yǎng)。通常在25cm2或者75cm2的培養(yǎng)瓶中進行擴增培養(yǎng)。
4. 細胞傳代
當293T細胞生長至80-90%的密度時,可以進行傳代培養(yǎng)。傳代時,用PBS或無酶的細胞分離液洗滌細胞,用胰蛋白酶/EDTA消化細胞,將細胞轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。
5. 抗生素的使用
為了保持培養(yǎng)物的純度,可以在培養(yǎng)基中添加適當濃度的抗生素,如青霉素/鏈霉素或者青霉素/鏈霉素/抗真菌劑。
6. 細胞密度的控制
細胞密度的控制是細胞培養(yǎng)的重要環(huán)節(jié)之一。通常,細胞在培養(yǎng)皿中的密度不宜過高,以避免細胞間相互抑制和營養(yǎng)不足。一般來說,將細胞培養(yǎng)在70-80%的密度左右是比較理想的。
7. 培養(yǎng)基的更換
細胞培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基的成分會發(fā)生變化,建議每2-3天更換一次培養(yǎng)基,以保持細胞生長的良好狀態(tài)。
8. 無菌操作
在細胞培養(yǎng)過程中,需要嚴格遵守無菌操作規(guī)程,保持培養(yǎng)器皿、培養(yǎng)基和儀器的無菌狀態(tài),以避免細胞培養(yǎng)物的污染。
9. 質(zhì)控檢測
在培養(yǎng)過程中,需要定期對細胞進行形態(tài)觀察和細胞數(shù)量計數(shù),確保細胞的健康狀態(tài)和純度。
總的來說,良好的細胞培養(yǎng)條件對于293T細胞的生長和擴增至關(guān)重要。嚴格控制培養(yǎng)條件,保持細胞的健康狀態(tài),對于保證實驗的準確性和重復性具有重要意義。